发布日期：2024-10-08 04:21 点击次数：143
植物成像cosplay 足交
在植物细胞及分子生物学商榷边界，成像时间的阻挡窜改与卓绝为科学家们提供了更精准、更高效的用具，以揭示生命科学的神秘。1989年，德国伯托（Berthold）研发出了第一代低光子影像系统LB980 Luminograph。1993年，在这仪器上完成了第一个动物和植物活体基因抒发试验，成为世界上第一个活体动（植）物光学影像系统。2010年，德国伯托研发出世界上第一台功能模块化蓄意的植物活体影像系统NightSHADE。
NightSHADE evo LB 985N 植物活体成像系统四肢一款专为植物商榷蓄意的高机灵度成像开辟，凭借其特等的性能和庸俗的应用，赶紧赢得了众人科研东谈主员的深爱。30多年来，很多众人著名的高校和科研机构的科学家们聘请了德国伯托的植物活体影像系统，包括剑桥大学、加州大学伯克利分校、杜克大学、华盛顿州立大学、清华大学、北京大学、复旦大学等，在很多高质料的期刊上发表了普遍的文件，如Nature， PNAS， Nucleic Acids Research， Development Cell， Molecular Plant， The Plant CellCurrent Biology， EMBO reports， eLife， Metabolic Engineering， Plant Biotechnology Journal， New Phytolo-gist， Plant Physiology等。
高机灵度与高分辨率
Berthold NightSHADE evo LB 985N配备了超机灵的冷CCD四肢检测器，经过德国伯托公司工程师的永远优化和用户使用反馈，赢得极高的系统机灵度。同期，-100℃的齐备制冷温度保证了超高的信噪比。＞90%的量子着力不错保证高质料的成像着力。对于极弱的信号，不错采用万古辰曝光的步地蕴蓄信号赢得很好的试验遣散。
专为植物而生的侧视成像模块
和传统的活体成像系统不同，NightSHADE提供了侧视不雅察的模块，将相机装配在侧面进行成像。在不影响植物滋长(如根的向地滋长等)的情况下，不雅察植物的根、茎等器官内主见基因的抒发情况。配合旋转样品平台，不错已毕高通量的试验不雅察，普及试验着力。
荧光成像系统
NightSHADE荧光模块具有特殊的能量适度系统——DIODE光能适度器，引发光能量不错在0~100%调遣，保证荧光引发能量的万古辰踏实，这对于试验遣散的准确性锐利常紧迫的。大孔径的辐射光滤光片轮蓄意理念保证了大成像视线和高机灵度。滤光片的更换终点不详，纯真性很高。
植物光照模块系统
在植物的生物节奏和光周期等商榷试验中，经常需要万古辰屡次拿获样本里面主见基因的抒发信号，NightSHADE的光照模块系统提供了植物在暗箱内滋长的条目。可调遣光照高度、波长及每个波长能量的光照系统，让试验东谈主员在统统这个词试验经由中无需迁移植物，不仅简化了试验操作也不详了试验东谈主员，同期也让试验遣散愈加准确。
丰富的配件
NightSHADE的旋转台不错使用不相同本载具，如培养皿、培养瓶、培养管等，配合侧视成像模块，不错对多个样本进行图像采集。同期，NightSHADE不错配备抗冷凝温控载物台，不错同期扬弃9个培养皿，并由用户笔据我方的试验要求将培养皿的温度适度踏果然一个设定的温度值。载物台也配备除雾电扇，驻防冷凝影响试验遣散。
应用例如
1 植物滋长发育商榷
这篇发表在Nature Communications上的著述，揭示了Copine卵白家眷中的BONZAI卵白在玉米和拟南芥的油菜素内酯信号传导中的要津作用，为优化农作物的农艺性状提供了新的分子靶标。商榷东谈主员将BON1和ZmBON1的编码序列插入到捎带cLuc的载体中，而将SERK4、SERK1、SERK2、BRI1等卵白的编码序列插入到捎带nLuc的载体中。然后，这些载体被转入农杆菌并用于侵染香烟叶片。淌若在叶片中BON卵白与SERK或BRI1卵白互相作用，荧光素酶的两部分会从头拼装成有活性的荧光素酶，通过添加荧光素并使用NightSHADE成像系统来检测荧光信号。遣散暴露BON卵白班师与SERK激酶互相作用，从而确保灵验的BRI1-SERK互相作用和磷酸化，如图1所示。该商榷鼓吹了对BR信号传导的意志，为优化有价值的农艺性状提供了紧迫主见，也为从更庸俗的角度商榷真核生物的类固醇激素信号传导和追随卵白开辟了谈路。
图1. BON离别与SERK和BRI1互相作用。a 酵母双杂交 (Y2H) 查考评估 BON1 的 A 结构域与 SERK4、SERK1 和 SERK2 的激酶结构域 (KD) 的互相作用。b 在用各自编码构建体转染的拟南芥原生质体中进行 BON1-HA 和 SERK4-FLAG 的 Co-IP 查考。c 分裂荧光素酶互补 (SLC) 查考暴露 BON1 和 SERK4 之间的互相作用。PIN1 用作阴性对照。d Y2H 查考暴露 ZmBON1 和 ZmSERK4-KD 之间的互相作用。e SLC 测定暴露本氏烟叶中 ZmBON1 和 ZmSERK4 之间的互相作用。ZmCDPK7 用作阴性对照。f SLC 测定暴露本氏烟叶中 BON1 和 BRI1 之间的互相作用。PIN1 用作阴性对照。g 在拟南芥原生质体中进行 BON1-HA 和 BRI1-GFP 的 Co-IP 测定。离别使用抗 HA 和抗 GFP 抗体检测 BON1-HA 和 BRI1-GFP 卵白。使用 PIN1-HA 四肢阴性对照。
2 植物抗病商榷
这篇发表在Nature Communications上的著述，克隆了小麦中的Pm55和Pm5V等位基因，并揭示了它们与扼制基因SuPm55的不同互相作用，为耕作具有握久和广谱白粉病抗性的小麦品种提供了分子机制和育种战略。商榷东谈主员构建了包含Pm55和SuPm55卵白CC结构域的荧光素酶互补载体，并将它们打针到香烟叶片中。48小时后，使用NightSHADE检测叶片中的荧光信号。试验遣散标明，Pm55a和SuPm55的CC结构域在卵白水平上发生了互相作用，如图2所示。NightSHADE在这项商榷顶用于考证Pm55和SuPm55卵白之间的互相作用，遣散标明它们如果然卵白层面发生了互相作用，这对于和会小麦白粉病抗性的分子机制具有紧迫意旨。
图2. Pm55和SuPm55的CC结构域在卵白质水平上互相作用。a SuPm55 在一叶至五叶幼苗中的抒发水平。b SuPm55在成年植物组织中的抒发水平。c SuPm55在 TF5V-1 和 Del5VS-4 叶鞘中的抒发水平。d 幼苗和成株阶段 TF5V-1 和 Del5VS-4 中Pm55a的抒发水平。e Y2H测定中 Pm55a和SuPm55的CC结构域之间的互相作用。AD，激活扣构域；BD，结合结构域。SD/-L-T，穷乏 Leu 和 Trp 的 SD 培养基；SD/-L/-T/-H/-A，穷乏 Leu、Trp、His 和 Ade 的 SD 培养基。列标题中的数字示意抒发 AD 和 BD 交融的酵母细胞的稀释系列。通过免疫共千里淀 (coIP) (f)、BiFC (g)和 Luc (h) 测定检测Pm55a和SuPm55的CC结构域之间的互相作用。i 当SuPm55的CC结构域皆打针到香烟叶子中时，SuPm55的CC结构域扼制了Pm55a引发的细胞死亡。
3 植物产量调控商榷
这篇发表在Nature Communications上的著述，发现并商榷了一组E2-E3酶对（SiUBC32和SGD1），它们通过泛素化油菜素内酯受体BRI1来调控谷物作物的种子大小和产量，为普及招物产量提供了新的分子机制和遗传资源。商榷东谈主员使用了NightSHADE成像系统来不雅察和纪录由SiUBC32和SGD1之间的互相作用所带来的荧光素酶活性。商榷东谈主员将SGD1和SiUBC32的编码序列离别克隆到含有nLuc标签和cLuc标签的抒发载体中。将含有nLuc-SGD1和cLuc-SiUBC32的抒发载体通过农杆菌介导的回荡要领共回荡到香烟细胞中。商榷东谈主员不雅测到了SGD1与SiUBC32在体内具有班师的互相作用，这种互相作用可能对调遣谷物作物的种子大小和产量具有紧迫意旨。通过这种互相作用，SGD1和SiUBC32可能共同参与了泛素化经由，格外是通过泛素化油菜素内酯受体BRI1来调遣植物的滋长和发育。
图3. SGD1 在分裂荧光素酶互补查考中与 SiUBC32 互相作用。SiBAS1 用作阴性对照。载体对共回荡到香烟叶中。
4 生物节奏商榷
这篇发表在PNAS上的著述揭示了SOS1卵白通过踏实GIGANTEA卵白来调遣植物生物钟对盐挟制的反馈，从而保管在不同盐浓度下的生物钟周期踏实性。SOS1在高盐水平或逐日波动的盐水平下保管着盐反应的稳态。商榷东谈主员通过聚乙二醇介导的转染将CCA1:LUC论说质粒引入拟南芥原生质体。为了对转基因植物进行生物发光分析，将含有论说基因的拟南芥幼苗培养7天，在12小时白光12小时阴雨轮回下进行。在幼苗上喷洒D-荧光素后，在23°C的恒定蓝光下，使用NightSHADE每2小时拿获一次生物发光图像。所齐集图像的振幅、周期和相对振幅疏漏采用快速傅立叶变换非线性最小二乘法，使用生物节奏分析软件系统进行估算，生物发光轨迹均被圭臬化为12至144小时采样计较的平均抒发水平，如图4所示。遣散标明，在盐挟制条目下，SOS1基因突变的幼苗暴露出比野生型更长的生物钟周期。SOS1在保管生物钟对盐挟制反馈的踏实性中起着要津作用，格外是在保护GIGANTEA（GI）卵白不被降解方面。
图4. 盐诱惑的钙开释调遣 sos1 中的日夜节奏和 GI 卵白品貌。（A、B、D 和 E）在恒定蓝光下，在用水（对照，A 和 B 的 n = 7；D 和 E 的 n = 12）、25 mM NaCl（A 和 B 的 n = 4；D 和 E 的 n = 7）、25 mM NaCl 加 1 mM 烟酰胺（n = 8；A 和 B）或 25 mM NaCl 加 50 μM GdCl3（n = 9；D 和 E）管制的 sos1-1 幼苗中监测 CAB2:LUC 的 LUC 论说基因活性节奏。（A 和 D）生物发光足迹。每个生物发光数据集皆圭臬化为 12 至 144 小时采样计较的平均抒发水平。(B 和 E) LUC 论说基因活性的周期臆度值。（C 和 F）用钙开释扼制剂管制阻断 sos1-1 中盐诱惑的 GI 降解。将旬日龄的 35S:GI-HA sos1-1 幼苗在有或莫得 50 mM 烟酰胺 (C) 或 1 mM GdCl3 (F) 的情况下用水（四肢对照）或 50 mM NaCl 孵育，并在 ZT0 管制后在指令的时辰点收货。用 α-HA 抗体检测 GI-HA。CBB，考马斯亮蓝染色。
5 乙烯信号与铜稳态商榷
这篇发表在New Phytologist上的著述商榷了拟南芥中SPL7卵白的羧基终端跨膜结构域对植物体内铜稳态和乙烯信号传导的调遣作用。商榷发现SPL7的跨膜结构域使其简略定位于内质网，并与RAN1卵白互相作用，这对于植物对乙烯的敏锐性至关紧迫。通过遗传和分子分析，著述揭示了SPL7在乙烯诱惑的三重反应中的作用，并发现SPL7简略通过其跨膜结构域调遣RAN1的品貌。此外，著述还发现SPL7受到乙烯信号通过EIN3的反馈扼制，为和会植物奈何归并铜稳态与乙烯信号传导提供了新的视角。商榷东谈主员通过使用NightSHADE系统进行的LUC互补成像分析，直不雅地不雅察到SPL7与RAN1之间的互相作用，并据此得出了对于它们在乙烯信号传导中作用的紧迫论断。
图5. SPL7 通过其跨膜结构域 (TMD) 与 RAN1 互相作用。(a) 使用与琼脂糖珠偶联的绿色荧光卵白 (GFP) 抗体对 35S:SPL7^746–818^-GFP 幼苗进行免疫千里淀质谱分析，随便出乙烯信号关系卵白。(b、c)荧光素酶 (LUC) 互补成像测定，用于考证全长 SPL7 (b) 和 SPL7TMD (c) 与 RAN1 的互相作用。RAN1 和 SPL7/SPL7TMD 离别与 LUC 的 N 端和 C 端部分交融，以生成 RAN1-nLUC 和 cLUC-SPL7/SPL7TMD 构建体。构建体与 cLUC、nLUC 或 EIN3-nLUC 结合，如图所示，在香烟叶表皮细胞中共抒发，并在荧光素存不才成像。热诚示意相对发光强度。（d）拟南芥中SPL7-RAN1互相作用的共免疫千里淀分析。从35S:GFP和 35S:SPL7^746-818^-GFP 幼苗中提真金不怕火的总卵白与偶联抗 GFP 抗体的琼脂糖珠全部孵育。
6 植物抗逆商榷
这篇发表在Plant Biotechnology Journal上的著述揭示了大豆中GmNFYA通过与GmFVE互相作用并竞争GmHDA13，正向调控大豆耐盐性的分子机制，并随便了一个可能有助于耕作耐盐大豆品种的GmNFYA脱手子单倍型。商榷东谈主员使用了德国伯托的NightSHADE仪器来进行分裂荧光素酶互补试验的发光检测。具体来说，他们期骗这个仪器测量了在香烟叶片中通过农杆菌介导回荡的分裂荧光素酶论说基因的活性，以考证GmNFYA与GmFVE以及GmFVE与GmHDA13之间的卵白质互相作用。遣散暴露GmNFYA简略舒缓GmFVE与GmHDA13之间的互相作用，这标明GmNFYA可能通过搅扰这一复合体来调遣大豆的耐盐性，如图6所示。
黑丝诱惑
图6. GmNFYA 互相作用卵白 GmFVE 充任盐反应的负调遣剂。(a) 免疫千里淀-质谱 (IP-MS) 暴露 GmFVE 是 GmNFYA 的互相作用卵白。(b) GmNFYA 在酵母双杂交查考中与 GmFVE 互相作用。-LWHA+X-a-Gal 示意 Leu、Trp、His、Ade 和 X-a-Gal 零碎板。–LW 示意 Leu 和 Trp 零碎板。(c) BiFC 分析本氏烟叶中 GmNFYA 和 GmFVE 之间的互相作用。(d) 本氏烟叶中 GmNFYA 和 GmFVE 互相作用的分裂荧光素酶互补查考。(e) 体内 GmNFYA 和 GmFVE 互相作用的免疫共千里淀 (CoIP) 查考。
要点
NightSHADE evo LB 985N 植物活体成像系统以其高机灵度和多功能性，为植物科学商榷提供了一个巨大的用具，匡助商榷者更好地和会和探索植物的生理和发育经由。通过使用这个系统，商榷东谈主员不错进行精准的试验，从而赢得更深切的生物学主张。
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对于基因
基因有限公司配置于1992年，是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和时间工作的轮廓工作商。基于“Gene Brightens Every Life • BioTech Connects the World”——“基因燃亮生命 • 生物时间联结世界”的愿景，专注于生命科学边界前沿时间的引进和奉行，竭力于推动该边界国内科研机构硬件水平及试验决策的校正与升级。同期，公司也一直竭力于自主品牌的科研开辟的研发与分娩，领有一系列通用性强、互补性高的自主品牌居品。
基因的工作齐集广宽宇宙各地十多个大中城市，领有包括仪器销售，试剂销售，阛阓与时间复古，维修，客服，物流等多个部门构成的完好工作体系。
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